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干货 | 限制性内切酶知多少？

何谓限制性内切酶？

限制性内切酶是一种能够识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA链中的磷酸二酯键的一类酶，简称限制酶。

不同的限制性内切酶会识别不同的DNA序列，它可以在识别序列内或距识别序列不远的位置处切割DNA，酶切之后会形成不同类型的产物，如下图中的BamHI形成5’粘性末端产物，KpnI形成3’粘性末端产物，EcoRV形成平末端产物。

▲ BamHI、KpnI、EcoRV酶切示意图

众所周知，限制性内切酶最常用于分子克隆实验中。但除了克隆，它还可以应用于疫苗研发生产、基因测序、SNP鉴定、ddPCR等领域。

限制性内切酶的命名规则

限制性内切酶的命名主要是根据细菌的属名、种名、菌株或血清型、发现的顺序而定，以BstEII为例，命名规则如下表所示：

表1：限制性内切酶的命名规则

限制性内切酶的分类

根据结构的复杂程度、作用方式与辅因子的区别，限制性内切酶可分为四大类，以下内容总结了各类的特点和典型酶种：

Type Ⅰ

• 特点：

1.同时具有识别切割和修饰活性；
2.能够识别DNA特定序列，切割位点距离识别位点不定，可达数千个碱基之远；
3.作用时需要ATP。

• 典型酶种：EcoB、Ecok等

Type Ⅱ

• 特点：

1.只具有识别切割的作用；
2.识别序列多为短的回文序列（一般为4-8bp），酶切位点通常就是所识别序列，特异性切割；
3.作用时需要Mg²⁺；

4.分子克隆中最常用的一类限制酶。

• 典型酶种：HindII、NotI等

Type Ⅲ

• 特点：

1.同时具有识别切割和修饰活性；
2.切割位点大约距离识别位点24-26bp；
3.作用时需要ATP。

• 典型酶种：Hinflll等

Type Ⅳ

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