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免疫共沉淀IP/CoIP

免疫共沉淀IP/CoIP

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产品名称: 免疫共沉淀IP/CoIP

英文名称: Co-Immunoprecipitation, Co-IP

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免疫共沉淀IP/CoIP

 

免疫共沉淀(Co- Immunoprecipitation, Co-IP)是研究细胞内蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,用抗体将相应特定分子沉淀的同时,与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。

免疫共沉淀原理:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质A的抗体去结合并沉淀A蛋白,那么与A在体内结合的蛋白质B也能同时沉淀下来,两种蛋白通过Protein AG形成复合物蛋白B—蛋白A—A蛋白抗体—Protein A/G”,上述复合物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳被分开,最后以免疫印迹WB或质谱检测目的蛋白。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合,也可用于确定一种特定蛋白质可能的新关联蛋白。

免疫共沉淀优点

1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;

2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;

3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

免疫共沉淀缺点

1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;

3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,此方法具有一定的风险性。

 

免疫共沉淀CoIP(上图为目的蛋白,下图为内参对照)