WB免疫检测：

Western blotting (WB)是在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定基础上发展起来的蛋白质检测技术，是将SDS-PAGE电泳分离的蛋白质样本转移到固相载体（硝酸纤维素NC膜，PVDF膜）上，以固相载体上的蛋白质作为抗原，与合适的抗体结合，再与酶标记的二抗结合，经过底物显色或放射自显影对蛋白质进行鉴定及定量的分析技术，其检测蛋白质的灵敏度为ng级，该技术广泛应用于医学、生物学研究领域。

基本步骤：

1.检测样本的准备（新鲜组织、细胞、血清、渗出液等），选择合适的WB抗体（单抗或多抗），实验前请与开阳生物联系确认是否有合适的抗体可以提供使用，以避免不必要的重复购买抗体。

2.蛋白质样本制备，根据实验要求选用适当的裂解液，选择制备总蛋白、膜蛋白、浆蛋白或核蛋白，某些特殊的蛋白如线粒体蛋白则需要选用试剂盒进行制备提取，必要时对蛋白进行定量。

3.SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白，并将分离的蛋白转移到NC膜或PVDF膜上。

4.目标蛋白的免疫学检测（一抗和二抗的反应），ECL化学发光法或DAB显色法显示蛋白条带。

5.目的蛋白条带的定量分析，利用软件测定其光密度值IOD，并与内参蛋白条带IOD值进行比较分析，计算目的蛋白相对表达量。